Investigação da atividade citotóxica e genotóxica de Roundup Transorb® em linhagens de células de Glioblastoma

Abstract

O glifosato é um herbicida de amplo espectro utilizado nas principais culturas agrícolas. Este agente pode causar contaminação ambiental em solos, águas superficiais e subterrâneas, sendo citado pela Agência Internacional de Pesquisa sobre o Câncer (IARC), como um provável carcinógeno humano. A p53 é conhecida como proteína supressora tumoral, atuando como um regulador chave da resposta celular ao estresse e aos danos ao DNA. Por isso, mutações no gene TP53, codificador da p53, são alterações genéticas comuns encontradas em vários tipos de câncer. Entre as diversas formulações do glifosato utilizadas no Rio Grande do Sul (RS, Brasil) se destaca a de nome comercial Roundup Transorb® (RT). Considerando o uso intenso do glifosato no RS e a falta de conhecimento dos efeitos e mecanismos celulares e moleculares desta formulação, este estudo teve por objetivo avaliar a citotoxicidade e genotoxicidade do RT em duas linhagens celulares de glioblastomas: U87MG (proficiente para p53) e U251MG (mutante para p53), bem como prospectar as principais proteínas envolvidas à exposição ao RT no sistema nervoso utilizando a Biologia de Sistemas. Também objetivou-se criar um produto técnico baseado no Ensaio Cometa, a fim de padronizar por meio de um protocolo audiovisual. Para a avaliação da citotoxicidade e genotoxicidade o Ensaio Cometa foi utilizado. Para mineração dos dados ferramentas de bioinformática como o STRING 11.0 e STITCH 5.0 foram utilizadas, servindo como base para o desenho das redes binárias no programa Cytoscape 3.6.0. Das análises dos testes in vitro verificamos a diminuição da viabilidade celular em doses a partir de 10 ppm, dose considerada segura pela ANVISA e CODEX. Danos ao DNA foram observados pelo Ensaio Cometa em concentrações a partir de 10 e 30 ppm para as linhagens U251MG e U87MG, respectivamente. Observou-se também apoptose tanto em células proficientes quanto nas mutantes para TP53. A citotoxicidade e genotoxicidade foram observadas em ambas linhagens celulares de maneira dose-dependente de RT. A rede gerada com a biologia de sistemas mostrou que a presença de p53 é um aliado para a regulação de processos biológicos de regulação da apoptose neural. Por fim, o produto técnico desenvolvido é um protocolo audiovisual do Ensaio Cometa disponível no canal do YouTube da Mutagen-Brasil.